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Plateaux techniques : "Purification de protéines", "Protéines recombinantes", "Anticorps"
(ACS)
- Mot(s) clé(s) :
Objet d'étude : anticorps, biopolymère, protéine de réserve des grains, protéine recombinante
Question sociétale et finalité, contexte : alimentation humaine, valorisation de la biomasse
Démarche, discipline : Biochimie et Biologie Moléculaire
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Objet d'étude : anticorps, biopolymère, protéine de réserve des grains, protéine recombinante
Question sociétale et finalité, contexte : alimentation humaine, valorisation de la biomasse
Démarche, discipline : Biochimie et Biologie Moléculaire
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- Description détaillée :
Les trois plateaux techniques de l’unité fournissent aux équipes des réactifs et outils pour Afficher la suite
Les trois plateaux techniques de l’unité fournissent aux équipes des réactifs et outils pour étudier et caractériser les biopolymères étudiés à différentes échelles et leurs interactions (protéines, polysaccharides, composés phénoliques). Les plateaux ont acquis des compétences particulières pour produire et étudier ces biopolymères dans des matrices complexes (alimentaires ou non). Une animation commune de ces plateaux est mise en place pour mieux répondre aux attentes des équipes de l’unité.

PLATEAU PURIFICATION DE PROTEINES :
Responsable : Véronique SOLE

Le plateau a pour vocation de purifier des protéines à partir de matières premières naturelles ou exprimées de façon hétérologue dans différents types d'hôtes.
Le plateau développe et met en œuvre les méthodes d'extraction et de séparation pour la préparation de fractions enrichies en protéines jusqu’à l'échelle préparative (10 mg-10 g) : centrifugation, ultrafiltration, chromatographies basse et haute pression.
Le plateau effectue une première caractérisation des extraits enrichis et des fractions protéiques purifiées : teneur en protéines, pureté (électrophorèse), rendement. En fonction des besoins de l'étude et dans le cadre de collaboration, l'état conformationnel des protéines (méthodes spectroscopiques) et leur activité pourront être caractérisés.
Ces protéines purifiées sont utilisées pour l'étude des relations structure - fonction, qu'il s'agisse de propriétés techno-fonctionnelles ou d'activité enzymatique ou biologique.
Différents substrats sont traités:
─ Protéines de céréales, légumineuses et oléagineux
─ Protéines alimentaires d'origine animale (lait, oeuf)
─ Protéines à activités biologiques (enzymes et inhibiteurs d’enzymes).
─ Protéines recombinantes (anticorps…)


PLATEAU PROTEINES RECOMBINANTES
Resp. : Jean-Charles GAUDIN

Ce plateau technique INRA/BIOGENOUEST® assume la production hétérologue de protéines recombinantes chez l'entérobactérie Escherichia coli et la levure méthylotrophe Pichia pastoris pour divers types de projets (biologie structurale, biochimie et physico-chimie des protéines, enzymologie, antigènes).

Les demandeurs y trouveront un soutien-conseil dans le choix du meilleur couple hôte-vecteur, des différentes stratégies de purification, dans l’optimisation de production en fonction des exigences structurales, fonctionnelles et de rendements du produit d'expression. À l'issue de cette discussion préalable, le demandeur prendra alors en charge la ou les constructions génétiques requises. Il sera assisté d’un technicien affecté au plateau technique durant toute la procédure, de la fermentation jusqu'à l'obtention d'une fraction subcellulaire enrichie en protéine recombinante ou d’une protéine purifié sur colonne d’affinité dans le cas les protéines « taguées histidine ». La purification de la protéine recombinante pourra être poursuivie sur le plateau « Purification » de l’Unité BIA en fonction du degré de pureté requis.

Des stratégies d'expression hétérologue chez E. coli et P. pastoris, et de purification des protéines recombinantes, ont été éprouvées dans le cadre des thématiques scientifiques développées au centre INRA de Nantes. Les systèmes dont nous disposons permettent actuellement de produire de façon routinière, en fonction du cahier des charges du produit d'expression, quelques dizaines de mg (pour les protéines produites sous forme fonctionnelle) jusqu'à quelques centaines de mg pour les protéines ou les polypeptides produits sous forme insoluble (polymères structuraux).

PLATEAU ANTICORPS :
Responsable : Olivier TRANQUET

Le plateau Anticorps est particulièrement spécialisé dans la production d’anticorps dirigés contre les composants des produits alimentaires et de leurs matières premières. Il produit et caractérise ainsi une centaine d’anticorps par an dirigés contre des protéines, des polysaccharides ou des composés phénoliques.

De par nos interactions avec les plateaux Purification et Protéines Recombinantes, les anticorps, monoclonaux ou polyclonaux, peuvent être aussi bien produit à partir de protéines natives, partiellement hydrolysées ou recombinantes.

Le plateau gère également la collection d’anticorps du département CEPIA dédiée aux aliments et leurs matières premières.
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- Champs de rattachement :
 

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